NEFA Assay Kit je nástroj pro kvantifikaci NEFA

Testovací souprava NEFA je nástroj pro kvantifikaci NEFA (Nitric Oxide). Používá se ke stanovení koncentrace NEFA ve vzorcích krve nebo tkání. NEFA je životně důležitá živina, která je zodpovědná za regulaci energetického metabolismu, srdeční dráždivosti, nervosvalového vedení, krevního tlaku a srážení krve. Nachází se především v kostech, svalech, měkkých tkáních a červených krvinkách.

Příprava

NEFA je malý, 50,2 kDa protein, který má schopnost vázat se na DNA. Jedná se o cytosolový komplex syntázy mastných kyselin typu I (FAS), který produkuje neesterifikovanou kyselinu palmitovou. V přítomnosti Acyl-CoA oxidázy (ACS) komplex FAS oxiduje 3-methyl-N-ethyl-N-(b-hydroxyethyl)-anilin na 4-aminoantipyrin, který je molekulárním prekurzorem acetyl-CoA. Tento proces je zásadní enzymatický proces pro všechny eukaryotické organismy.

Ačkoli NEFA nemusí mít tak mohutnou hmotu jako tuk, je důležitým zdrojem paliva pro periferní tkáně. Je metabolizován v játrech a transportován v komplexu s albuminem do periferních tkání. NEFA je také uvolňována thioesterázovou (TE) doménou komplexu FAS.

Pipetování

Soupravy ELISA se používají k detekci malých chemických sloučenin, proteinů a peptidů. Tyto kity jsou založeny na rekombinantních proteinech exprimovaných v E. coli. Soupravy neobsahují azid, thimerosal a další přírodní zdroje.

V soupravě jsou reagencie jako BSA, apyrogenní ředicí pufr a promývací roztok. Promývací roztok je stabilní dva týdny při 2-8°C. Ředicí pufr obsahuje 0,9 % fyziologického roztoku.

Sada má vnitřní standard NEFA. K tomu se přidá NEFA v koncentraci, která odpovídá očekávané koncentraci ve vzorku. Pro výpočet koncentrace NEFA ve vzorku se měří absorbance modrofialového pigmentu při 546 nm.

Kolorimetrické

Použití sady WAKO NEFA vyvolalo řadu výsledků, včetně některých, které jsou nesmyslné. Přesto je souprava NEFA důstojným uchazečem, pokud jde o stanovení relativního obsahu mastných kyselin ve vzorcích živočišné tkáně. Jako taková je NEFA kit jedním z nejoblíbenějších laboratorních testů. Souprava je dodávána s pokyny pro testování různých typů vzorků, včetně krve, séra, slin a různých lipidů.

Nejzajímavější částí soupravy je, že ji lze použít k měření různých mastných kyselin, včetně těch, které se běžně vyskytují v lipidech. Sada je dodávána s řadou enzymů navržených k detekci různých mastných kyselin, včetně mastných kyselin C-8 a C-16, které se vyskytují u lidí a zvířat. Přesto se souprava nedoporučuje pro použití ve vysoce přesných koncentracích FFA v širokém rozsahu.

Elektrochemické

NEFA jsou důležité mastné kyseliny pro lidské zdraví, ale jen zřídka jsou hodnoceny. Jejich detekce je navíc velmi nákladná. Proto sledování změn jejich koncentrací může pomoci v přesnější prevenci a léčbě onemocnění. V této studii byla vyvinuta elektrochemická testovací souprava pro NEFA s použitím PDA-MWCNT jako povrchu senzoru. Tato elektroda vykazovala dobrou elektrokatalytickou aktivitu pro oxidační kroky NEFA a mohla být použita v reálných aplikacích.

Enzymová elektroda sestávala z vícevrstvého kompozitního filmu PDA-MWCNT a ACOD, ACS a polymeru. Pořadí vrstev bylo zvoleno tak, aby odpovídalo pořadí enzymatické reakce. Bylo zjištěno, že ACS a ACOD zůstaly ve filmu biologicky aktivní.

Koncentrace NEFA v T2D

Koncentrace NEFA v krvi byly studovány v souvislosti s obezitou a hypertenzí. Bylo prokázáno, že tyto sloučeniny podporují zvýšení BP prostřednictvím a1-adrenergní stimulace a zvyšují oxidační stres. NEFA jsou také spojovány s metabolickým syndromem. Tyto sloučeniny mohou být důležité při rozvoji hypertenze.

Bylo navrženo několik modelů pro popis plazmatické odpovědi NEFA na intravenózní stimulaci glukózou. Bostonský model přesně zobrazil čtvrtou fázi zvýšení koncentrace NEFA. Model však nepopisoval počáteční fázi latence. Fabianův model použil k popisu této fáze jednoduchý exponenciální sklon. Podobně Thomasethův model nebyl schopen popsat odrazovou fázi.

Hladiny NEFA v triglyceridech

Několik studií zkoumalo účinky bariatrické chirurgie na složení NEFA v plazmě. V metaanalýze publikované v roce 2016 byly hladiny NEFA v séru sníženy 6 a 12 měsíců po operaci. To mohlo být způsobeno sníženou hladinou inzulínu. V jiné studii byly plazmatické NEFA měřeny u skupiny obézních pacientů před a po operaci bypassu žaludku Roux-en-Y.

Koncentrace sedmi NEFA byly sníženy 9 měsíců po operaci. Linoleát (omega-6 mastná kyselina) byl snížen o 18:2, stearát o 18:0 a oleát o 16:0. Koncentrace dokosahexaenoátu však nebyla ovlivněna. NEFA byly převedeny na methylestery mastných kyselin (FAME). Ty byly poté analyzovány plynovou chromatografií-hmotnostní spektrometrií (GC-MS).