Vysoce kvalitní souprava pro stanovení adenosindeaminázy

Adenosindeamináza (ADA) je přirozený enzym, který se podílí na imunitní odpovědi. Funkcí adenosin difosfátu (ADP) je aktivovat buňky a provádět membránovou permeabilizaci a cytotoxický účinek. Adenosin byl identifikován jako jedna z nejdůležitějších aminokyselin potřebných pro normální činnost lidského mozku. Je syntetizován v játrech a je distribuován v krevní plazmě působením imunitního systému. Adenosin difosfát je nosičem antivirového genetického materiálu. V Biomedical Expo bude souprava ADA Activity Assay Kit použita v kombinaci s dříve zmíněným BioVision Cytokine.

Adenosindifosfát (ADP) je nosičem růstového faktoru T-lymfocytů. V BioVision Cytokine se adenosindeamináza (ADO) extrahuje z vypreparované ledviny a analyzuje se pomocí komerčně dostupného spektrofotometrického automatického testu. Činidlo bylo předem ošetřeno anti-fosfo-dglukózou (PI), aby se zabránilo jeho reakci s analytem.

Složení komerčně dostupné soupravy AIDA Activity Assay Kit zahrnuje dvě hlavní složky – činidlo a laboratorní vybavení. Činidla obsažená v Aida Activity Assay Kit zahrnují purifikovaný enzymový koktejl (Sigma-FCA). Laboratorní vybavení se skládá ze skeneru mikrodestiček (namontovaného za podložním sklíčkem), skleněného nádobí, knihy výsledků standardní křivky a oplachové láhve. Před použitím musí být vzorky Aida Activity Assay Kit omyty dechlórovanou vodou. Použití reagencií a laboratorního vybavení není omezeno pouze na laboratorní testy.

Aby se prověřila schopnost soupravy Aida Activity Assay Kit měřit celkovou aktivitu adenosindeaminázy, bylo provedeno několik experimentálních sezení. První sezení sestávalo ze čtyř dnů manuálního trasování. Sto padesát mikrolitrů Aida-GFP bylo rozpuštěno ve vodovodní vodě a smícháno s fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem. Po dvaceti minutách byly vzorky testovány na obrazovce HPLC hmotnostní bilance.

Druhé sezení zahrnovalo další dva dny ručního sledování. Vzorky byly injikovány do zakřivené kazety po dobu dvou hodin, jak je popsáno výše. Třetí sezení zahrnovalo další tři dny manuálního sledování ve stejné místnosti, po nichž následovaly čtyři hodiny subkutánních injekcí adenosindeaminázy (ADCA). Vzorek krve byl odebrán po jedné hodině pro analýzu.

Pro testování slin bylo 500 mikrolitrů standardních roztoků deaminázy a pH zvýšeno smícháno v nesterilním razníku. Prasatům bylo umožněno pít celou řadu tekutin, od čisté vody až po dietní sodu, podle potřeby. Když standardní roztoky dosáhly svého bodu varu, bylo zavedeno kapátko s předem stanoveným objemem slin a byla měřena aktivita adenosindeaminázy.

Poslední skupina šesti vzorků byla analyzována pomocí komerčně dostupné soupravy pro stanovení Phosphorimidazoleamine Assay Kit na bázi slin (Saproflavil; Thermo Instruments). V této sadě testů byla jedna kapka činidla fosforimidazolamin/slinné ada smíchána s objemem vodovodní vody a vysušený prášek byl přidán ke vzorkům. Po třiceti minutách byl odebrán druhý vzorek stejného vzorku. V tomto případě byla aktivita ve slinách měřena okamžitě. Souprava byla speciálně navržena pro měření aktivity kyseliny v lidských slinách. Jak se očekávalo, bylo možné detekovat značné množství aktivity.

Jak se dalo očekávat, oba analyzátory poskytly podobné výsledky. Vysoce specifická povaha analýzy slinné pozitronové emisní tomografie (SPECT) spolu s vysoce citlivou metodikou (vysoká detekce intraorálních tekutin) vedly k trvale vysoké přesnosti a významným měřením. Laboratorní personál použitý pro postupy byli všichni odborníci v oboru. Neexistoval žádný důkaz kontaminace nebo jakékoli chyby experimentu. Testované osoby poskytly informovaný souhlas a postup se řídil doporučeními stanovenými Americkou asociací klinických endokrinologů. Celkově výsledky získané ze soupravy Adenosine Deaminase Assay Kit vykazovaly dobrou reprodukovatelnost, což bylo potvrzeno samostatnými studiemi nezávislých klinických laboratoří.